AKT蛋白激酶 B是 PI3K-AKT 经典通路的核心枢纽分子广泛存在于人、小鼠各类体细胞中是调控细胞存活、增殖、代谢、血管生成乃至肿瘤耐药、免疫稳态的关键开关。AKT 存在 AKT1/2/3 三种亚型统称 pan-AKT只有苏氨酸 308 位点T308发生磷酸化修饰后AKT 才会被完全激活启动下游一整套促生存、抗凋亡级联反应。一、p-AKT (T308) 的核心生物学意义1.生理稳态调控正常细胞中生长因子、细胞因子刺激细胞膜受体后激活 PI3K催化 PIP2 转化为 PIP3招募 AKT 至细胞膜PDK1 激酶精准磷酸化 AKT 的 T308 位点激活后的 p-AKT (T308) 磷酸化下游 TSC2、BAD、FOXO、mTOR 等靶蛋白平衡细胞生长速度、抑制细胞生理性凋亡、维持葡萄糖代谢平衡保障组织正常修复与发育。2.病理恶变驱动标志肿瘤、慢性炎症、纤维化病变中上游受体突变、PTEN 抑癌基因缺失会造成 PI3K 持续亢进大量 AKT 被磷酸化高丰度 p-AKT (T308) 会强力压制癌细胞凋亡、加速肿瘤无限增殖、诱导上皮间质转化EMT、催生新生血管同时介导靶向药、化疗药耐药是肺癌、肝癌、乳腺癌、淋巴瘤等实体瘤与血液瘤通用的恶性生物标志物。在自身免疫病中异常活化 AKT 还会过度驱动 T/B 细胞增殖放大慢性炎症损伤。3.药物药效评价金标准所有靶向 PI3K、AKT、mTOR 通路的小分子抑制剂、单抗、双抗、ADC 药物体外细胞药效筛选阶段都必须定量检测细胞裂解液内 p-AKT (T308) 水平给药后 p-AKT (T308) 下调幅度直接直观反映候选分子对整条致癌通路的阻断抑制能力是高通量药物筛选不可或缺的检测指标。二、p-AKT (T308) 主流检测技术对比传统检测手段以 Western BlotWB为主但 WB 操作繁琐、耗时长、通量低、只能半定量很难适配药企一次性筛选数百上千份候选化合物的 HTS 需求ELISA 存在洗板步骤多、样本损耗大、数据批间误差高的短板。TR-FRET 时间分辨均相荧光免疫技术完美解决以上痛点全程免洗、微量样本、孵育时间短、兼容 96/384 孔板自动化工作站荧光背景干扰极低定量重复性优异成为通路磷酸化高通量筛选的首选平台。三明治夹心型 TR-FRET 体系依靠一对特异性抗体分别锚定磷酸化位点与蛋白骨架实现仅针对活化 p-AKT (T308) 的特异性识别完全不识别总 AKT 或无磷酸化的静息型 AKT检测特异性极强。三、适配高通量筛选的成熟检测试剂盒推荐针对 p-AKT (T308) 精准定量的大量实验需求THUNDER™ Phospho-AKT pan (T308) TR-FRET Cell Signaling Assay Kit 是高度适配的标准化工具。试剂盒采用三明治 TR-FRET 免疫检测原理可半定量检测人、小鼠细胞裂解样本里全部活化 AKT1/2/3 亚型配对抗体制备源自小鼠、大肠杆菌表达体系特异性与批次稳定性经过完整验证。试剂盒内置全套即用型实验组分包含配对荧光一抗、阳性对照裂解液、细胞裂解缓冲液、荧光反应液与磷酸酶抑制剂开箱即可完成从细胞裂解到荧光读数的全流程操作配套详细技术数据表与通用操作手册不管是高校机制研究还是药企大规模化合物高通量药效筛选都能稳定输出重复性优异的检测数据。